实时荧光定量PCR（Real-time quantitative PCR）是一种常用的基因表达分析技术，能够准确快速地检测样本中特定基因的表达水平。PCR结果的可靠性与实验细节密切相关，以下是一些可能影响PCR结果可靠性的细节因素。

样本采集和处理：样本的采集和处理是PCR实验的首要步骤，样本的质量直接影响PCR结果的可靠性。例如，采集到的样本应避免被污染，样品应储存于适当的环境条件下，样品的预处理步骤也需要标准化，以减少不必要的变异。

RNA提取和纯化：PCR分析中需要从细胞中提取总RNA或mRNA。RNA的提取和纯化过程涉及到RNA酶的去除、DNA的去除和RNA的稳定等重要操作。如果提取和纯化过程不完整或存在误差，将导致RNA的完整性和纯度下降，从而影响PCR结果的准确性。

反转录反应（RT）：在PCR实验中，需要将RNA转录成cDNA，这个过程主要通过反转录反应实现。RT反应的条件和可靠性对PCR结果的准确性有着重要影响。合适的反转录酶、适当的温度和时间以及适宜的反转录缓冲液浓度都是关键参数。

引物设计：引物是PCR实验中至关重要的组成部分，它的设计质量将直接影响PCR的灵敏度和特异性。引物应设计在目标基因的高保守区域上，避免与其他相关基因产生非特异性扩增。此外，引物之间的配对也应避免发生二聚体和交叉反应。

模板DNA浓度和质量：PCR反应中的模板DNA浓度和质量，直接影响PCR结果的灵敏度、特异性和重现性。合适的DNA浓度能够确保PCR反应的线性扩增，在不同样本之间的DNA浓度差异会导致扩增效率不同，终影响PCR结果的可靠性。

扩增条件：PCR反应的扩增条件包括反应体系组成、温度和时间等。这些条件需要根据引物的特性和要扩增目标的大小和特点进行优化设定。恰当的扩增条件能够提高PCR反应的特异性和效率，避免非特异性产物或扩增效率低下。

室内环境和操作技术：PCR实验需要在无菌环境下进行，并注意防止污染问题。恰当的实验室温度和湿度以及严格的消毒措施能够减少PCR反应中的污染可能。此外，操作技术的熟练程度也对PCR结果的稳定性和可靠性有重要影响。

内参基因选择：内参基因在PCR实验中用于校正实验中可能存在的实验差异，并作为一个比较的参考。合适的内参基因应具有稳定的表达水平、与目标基因没有相互作用和调节关系，并且能够被准确地检测和定量。

PCR扩增曲线分析：实时荧光定量PCR通过实时监测反应体系中荧光信号的变化，生成PCR扩增曲线。PCR扩增曲线的分析是评估PCR结果可靠性的重要步骤，需要对曲线的斜率、Ct值和R2值等参数进行准确的判断和解释。

数据分析和统计处理：PCR实验的数据分析和统计处理是保证PCR结果可靠性的重要环节。适当的统计方法能够有效评估PCR结果的准确性，并对样本之间的差异进行相关性分析和差异比较。