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实时荧光定量PCR技术的简介
自从PCR技术问世以来，随着技术的推广和应用，派生了许多适用于不同目的的改良方法和技术，如模板为RNA的逆转录PCR（Reverse Transcriptase PCR，RT-PCR）；能同时检测不同目的基因的多重PCR（multiplex PCR）；能提高扩增反应的敏感性和特异性的巢式PCR（nested PCR）；通过检测荧光素、或同位素、或酶活性来显示目的片段存在的标记引物PCR（Labeled Primers PCR）；将抗原抗体的特异性反应与PCR技术结合起来，以检测微量蛋白质的免疫PCR（IM-PCR）以及能对待测模板定量的实时荧光定量PCR等等。
实时荧光定量PCR是指在PCR体系中加入荧光基团，使PCR产物和荧光相关，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。该技术不仅实现了PCR从定性到定量的飞跃，而且整个PCR过程可实现自动化，且耗时短，操作方便，不易污染。
一、定量原理
实时荧光定量PCR是利用荧光信号的变化，实时检测PCR扩增反应中每一个循环扩增产物量的变化，通过Ct值和标准曲线的分析对起始模板进行定量分析。
1．扩增曲线
在实时荧光定量PCR进程中，通过荧光定量PCR仪，在PCR每个循环进行一次荧光信号的收集，以荧光强度为纵轴，循环次数为横轴，所得到的曲线称为PCR的扩增曲线。
2．荧光阈值
实时荧光定量PCR的前面十多个循环，荧光强度变化不大，荧光强度的平均值可称为基线值，在基线值的基础上，增加一定数量后得到一荧光值，这一点后，随着循环次数的增加，荧光强度明显增强，因此称该值为荧光阈值。一般取PCR反应的前15个循环的荧光信号作为荧光本底信号。
3．Ct值与标准曲线
Ct值是指PCR扩增过程中，扩增产物的荧光信号达到设定的阈值时所经过的扩增循环次数。实验发现，Ct值与反应管内的模板数密切相关，起始拷贝数越多，Ct值越小。
二、分类与工作原理
根据引入荧光标记的类型，常用的实时荧光定量PCR有以下几种：SYBR Green法、水解探针法（TaqMan法）、分子信标法等。
