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实时荧光定量PCR技术概念
实时荧光定量PCR（Quantitative Real-time PCR），又名定量PCR，是一种在DNA扩增反应中，以荧光化学物质测每次聚合酶链式反应（PCR）循环后产物总量的方法。它通过内参或者外参法对待测样品中的特定DNA序列进行定量分析。
实时荧光定量PCR是在PCR定性技术基础上发展起来的核酸定量技术。
实时荧光定量PCR技术原理
它的原理是在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，通过标准曲线对未知模板进行定量分析。
实时荧光定量PCR技术优点
a.可进行准确的定量检测，实时性和准确性好；
b.定量范围宽；
c.灵敏度高；
d.特异性和可靠性更强，克服了假阳性；
e.操作简单快速，无 污染，无须后处理和电泳检测；
f.安 全，技术易于学习，易于进行电脑化数据管理；
g.目前已广泛应用于分子生物学研究和医学研究等领域。
PCR反应基本步骤
a.变性：通过加热使模板DNA双链之间的氢键断裂，双链分开而成单链的过程，高温使双链DNA解离形成单链（94℃，30s）。
b.退火：当温度降低时，引物与模板DNA中互补区域结合成杂交分子，低温下，引物与模板DNA互补区结合（55℃，30s）。
c.延伸：在DNA聚合酶、dNTPs、 Mg2+存在下，DNA聚合酶催化引物按5’→3’方向延伸，合成出与模板DNA链互补的DNA子链，中温延伸，DNA聚合酶催化以引物为起始点的DNA链延伸反应（70-72℃，30-60s）。
以上述三个步骤为一个循环，每一循环的产物均可作为下一个循环的模板，经过n次循环后，目的DNA以2n的形式增加。
