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如何选择热启动Taq酶

2022-04-20 15:58:59

 热启动Taq酶应用较广,与普通Taq酶相比,热启动Taq酶能有效避免一些非特异扩增和引物二聚体的形成,能有效提高目标基因的扩增成功率。特别在基因检测领域,热启动Taq酶已被确定为行业强制性标准,普通Taq酶不得使用。以上可见,热启动Taq酶应用非常广泛。面对这么多的热启动Taq酶产品,我们应如何选择?

热启动Taq酶

选择扩增效率高的热启动Taq酶。PCR扩增效率与Taq酶的性能密切相关,好的Taq酶反应体系经优化后,扩增效率在95%以上,起始模板量扩增范围宽。在目标基因含量较低时能够获得满意的扩增,在模板量较高时,也不易中毒,指数扩增期较长。而性能较差的Taq酶,即使反应体系经多次优化,扩增效率仍达不到90%,扩增曲线“S”型不明显,斜率较小,曲线低平。模板量较低时扩增不出来,较高时扩增效果也不理想。因而,选择高扩增效率的Taq酶对PCR、qPCR能否成功是否重要。我们实验室对国内常用的几家公司的热启动Taq酶曾经进行过比较,将GAPDH质粒5倍梯度稀释,将qPCR结果做成标准曲线,结果ABI和BIOG热启动Taq酶扩增效率都在95%以上,每反应体积能够检测的低量可达2pg,而某国际知名品牌T的热启动Taq酶的扩增效率只有90%,在模板量为2pg时无扩增曲线。

选择酶动力强的热启动Taq酶。Taq酶的酶动力与扩增效率有关。一般热启动Taq酶的酶动力越强,PCR扩增的指数增长期越长,‘S型’曲线更加典型,荧光信号值更高,而且更适合做多重PCR检测。我们曾比较过多家公司的热启动Taq酶,在国外品牌中,英国Bioline公司的热启动Taq酶(Immulase)酶动力较好,可做4重PCR,等量起始模板CT30时的荧光信号值高。在国内品牌中,BIOG热启动Taq酶的指数期较长,可做3重PCR,且扩增曲线的‘S’型不受影响,其它的国产品牌一般只能支持2重反应,在做3重反应时,扩增曲线低矮,荧光信号值较低,无典型扩增曲线,结果很难判定。

选择灵敏度高的热启动Taq酶。一般说,Taq酶的扩增效率高,灵敏度就高,但也有不一致的情况。如果要扩增的样本目标基因丰度较低,建议对Taq酶的扩增灵敏度进行检测。常见的检测方法是将目标基因质粒片段进行10倍或5倍梯度稀释,在较低的几个稀释度进行PCR检测,选择检测灵敏度较高的热启动Taq酶。


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