廊坊市热启动Taq酶优势
发布时间:2024-12-26 01:01:12
廊坊市热启动Taq酶优势
常规普通PCR常见问题:1. 优化反应条件,梯度摸索退火温度,延长退火延伸时间,增加反应循环数(30-45区间为宜)。2. 对核酸模板进行纯化,或使用商业化核酸提取试剂盒进行提取,增加核酸模板的上样量。3. 优化反应体系(预混体系除外),改变检测体系中的Mg2+浓度及dNTPs用量,更换体系中Buffer。4. 重新设计引物,避免引物二聚体和链内二级结构,在一次稀释引物后可分装成多支小管,减少反复冻融次数。

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热启动PCR(hot start PCR)是指使Taq DNA 聚合酶只有在样品温度至少超过70℃时才发挥作用的PCR,可提高反应的特异性。Taq DNA 聚合酶通常在比适宜温度低得多的条件下仍有较强的活性。PCR 反应的初加热过程中,样品温度上升到70℃之前,在较低的温度下引物可能与部分单链模板形成非特异性结合,并在Taq DNA 聚合酶的作用下延伸。结果会导致非靶序列的扩增,影响反应的特异性。热启动可减少非靶序列的扩增,提高反应的特异性。在引物设计时如果某位点因为遗传元件的定位而受限,如site-directed 突变、表达克隆或用于DNA 工程的遗传元件的构建和操作等情况,热启动PCR 尤为有效。

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热启动酶是耐高温的依赖于DNA模板的DNA聚合酶,来源于嗜热的嗜热水生菌Thermus aquaticus YT一1,一般应用于PCR反应。TaqDNA聚合酶是一种M92+依赖酶,反应体系中须有Mg2+存在,然而保持适当的Mg2+浓度十分重要,因为Mg2+浓度过高或过低均会影响引物与模板的结合、模板与PCR产物的解链温度、引物二聚体的形成以及酶的活性与精 确性。

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动物为什么要打预防针:主要是预防和控制传染病的发生。传染病的发生具备传染源、传染途径和易感动物三个环节,缺一不可。在防疫中,切断任何一个环节,传染即告终止。打预防针是将有效的生物制品(疫苗、菌苗、类毒素)作为抗源,引入动物机体,或注入免疫血清,以激发动物机体产生特异性抵抗力,使易感动物转化为不易感动物的一种手段,由于过去通常采用注射法,所以人们习惯上把免疫接种称为打预防针。有组织、有计划地进行免疫接种,是预防和控制动物传染病发生流行的重要措施之一,在某些传染病如禽流感、口蹄疫、猪瘟等病的防控措施中,免疫接种更具有关键性的作用。所以,打预防针是为养殖业保驾护航,可以避免疫病发生,减少死亡损失,使养殖业增收。