辽源市热启动Taq酶应用领域

疫苗:是指用物理或化学方法将致病微生物杀死或致弱而制成的一种无致病性、有免疫原性的制剂，或者是直接提取致病微生物的免疫原性蛋白或编码免疫蛋白的基因，利用分子生物学技术制成的具有免疫原性而无致病性的制剂。目前的疫苗有病毒(细菌)死苗、病毒(细菌)活苗、亚单位苗、基因工程苗等。血清型:是指微生物学中种以下的一种分 型。因为微生物在种内有不同的抗原性，因此可分不同的抗原型或血清型。

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热启动Taq酶产品优势;1. 灵敏度高：可直接扩增1个拷贝的支原体DNA。2. 化学修饰，无动物性DNA污染。3. 性价比高：相对市面上zui常用的热启动聚合酶性价比更高。4. 扩增效率高：荧光定量PCR起峰快，Ct值低，扩增效率高。5. 可重复性高：荧光定量PCR扩增曲线重合度高，受干扰影响少。热启动Taq酶应用：1. 热启动PCR 2. 荧光定量PCR 3. DNA序列测定4. TA cloning.

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在动物疫病诊断标准等技术规范中，酶联免疫吸附试验对试验中加底物的反应步骤进行规定，规定固定的时间，然后加终止液。但是，在许多酶联免疫吸附试验中，加底物的反应步骤需要根据阴性、阳性对照反应情况对反应的时间进行调整。如当阴性与阳性对照的反应结果出现后，实验人员则可以加终止液。有关资料规定的时间可能太长或者太短，这样会对反应的结果产生影响。如果加底物的反应时间较长，样品则有可能呈现阳性，易导致误诊情况的产生。

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在PCR反应早期，产生荧光的水平不能与背景明显地区别，而后荧光的产生进入指数期、线性期和终的平台期，因此可以在PCR反应处于指数期的某一点 上来检测PCR产物的量，并且由此来推断模板初的含量。为了便于对所检测样本进行比较，在real-time Q-PCR反应的指数期，首先需设定一定荧光信号的域值，一般这个域值（threshold）是以PCR反应的前15个循环的荧光信号作为荧光本底信号 （baseline），荧光域值的缺省设置是3～15个循环的荧光信号的标准偏差的10倍。如果检测到荧光信号超过域值被认为是真 正的信号，它可用于定义 样本的域值循环数（Ct）。Ct值的含义是：每个反应管内的荧光信号达到设定的域值时所经历的循环数。研究表明，每个模板的Ct值与该模板的起始拷贝数的 对数存在线性关系，起始拷贝数越多，Ct值越小。利用已知起始拷贝数的标准品可作出标准曲线，因此只要获得未知样品的Ct值，即可从标准曲线上计算出该样 品的起始拷贝数。

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化验室诊断方法采用的检测依据有以下几种:①国家标准以及农业标准;②动物疫病检测的其他规范:③化验室自行设定的检测方法。不管采用何种方法，都需要考虑化验室自身的条件及样品类型，如在对伪狂犬病进行诊断时，实验室有酶标仪，没有基因扩增仪，在诊断时检测人员可采用酶联免疫吸附试验进行诊断。如果送检样品为血清，检测人员则可以采用酶联吸附试验，而不需要采用动物接种试验与病毒分离鉴定方法。

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Taq酶的酶动力与扩增效率有关。一般热启动Taq酶的酶动力越强，PCR扩增的指数增长期越长，‘S型’曲线更加典型，荧光信号值更高，而且更适合做多重PCR检测。我们曾比较过多家公司的热启动Taq酶，在国外品牌中，英国Bioline公司的热启动Taq酶，酶动力较好，可做4重PCR，等量起始模板CT30时的荧光信号值高。在国内品牌中，BIOG热启动Taq酶的指数期较长，可做3重PCR，且扩增曲线的‘S’型不受影响，其它的国产品牌一般只能支持2重反应，在做3重反应时，扩增曲线低矮，荧光信号值较低，无典型扩增曲线，结果很难判定。